Evaluación de primers en la identificación del gen PEPT1 en diferentes tejidos de juveniles híbridos de tilapia red florida

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Authors
Hidalgo Santos, Miguel Ángel
Reyes Mero, Andrés Marcelo
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Tutor
Co-Tutor
Publisher
Universidad Técnica de Manabí
Campo Amplio
Campo Espec�fico
Num. P�ginas
Date
2016
Abstract
In the present investigation primer sets for identification in the PepT1 gene in different tissues of juvenile hybrid tilapia Red Florida were used. The goal was to find, within four primer pairs designed by bioinformatics, the pair of specific primers in the amplification of gene PepT1. The sample processing began with ethanol fixation in 96% of tissue juvenile tilapia temperature under two conditions: Ambient and deep freezing at -18 ° C. The DNA extraction protocol used was that of Genomic DNA Mini Kit PureLink® (Catalog Numbers K1820-01, K1820-02, K1821-04) Invitrogen®. For PCR amplification of different regions belonging to PepT1 gene, various modifications of the programming performed thermocycler. The amplicons were analyzed by agarose gel electrophoresis. Primer set was more effectively Fw 11 - 6bRev as a single band in electrophoresis was visualized, the other had double band, additionally the condition ideal holding temperature was room for its better observation gel. This study will help in later investigations nutritional tilapia, allowing lower costs and shorter time required for analysis by use of this first specific also measuring gene expression evidence PepT1 nutrient assimilation linked thereto.
Description
En la presente investigación se utilizaron juegos de primers para la identificación en el gen PepT1 en diferentes tejidos de juveniles híbridos de tilapia Red Florida. El objetivo fue encontrar, dentro cuatro pares de primers diseñados mediante bioinformatica, el par de primers específico en la amplificación del gen PepT1. El procesamiento de las muestras se inició con la fijación en etanol al 96% de los tejidos de las tilapia de juveniles bajo dos condiciones de temperatura: ambiente y ultracongelación a -18°C. El protocolo de extracción de ADN que se utilizó fue el de Mini Kit PureLink® Genomic DNA (Catalog Numbers K1820-01, K1820-02, K1821-04) INVITROGEN®. Para la amplificación por PCR de las diferentes regiones pertenecientes al gen PepT1, se realizó varias modificaciones de la programación del termociclador. Los amplicones fueron analizados por electroforesis en gel de agarosa. El juego de primers con mayor efectividad fue el 11 Fw – 6bRev pues se visualizo una sola banda en electroforesis, los demás presentaron doble banda, adicionalmente la condición de conservación ideal fue la de temperatura en ambiente por su mejor observación en el gel. Este estudio ayudará en investigaciones nutricionales posteriores de cría de tilapia, pues permite abaratar costos y menor tiempo requerido para análisis por la utilización de este primer especifico, asimismo la medición de expresión del gen PepT1 evidencia la asimilación de nutrientes ligado al mismo.
Keywords
AMPLICONES, ELECTROFORESIS, ULTRACONGELACIÓN, ADN, FIJACIÓN EN ETANOL, BIOINFORMÁTICA
Citation
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