Evaluación de primers en la identificación del gen PEPT1 en diferentes tejidos de juveniles híbridos de tilapia red florida
Evaluación de primers en la identificación del gen PEPT1 en diferentes tejidos de juveniles híbridos de tilapia red florida
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Authors
Hidalgo Santos, Miguel Ángel
Reyes Mero, Andrés Marcelo
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Tutor
Co-Tutor
Publisher
Universidad Técnica de Manabí
Campo Amplio
Campo Espec�fico
Num. P�ginas
Date
2016
Abstract
In the present investigation primer sets for identification in the PepT1 gene in
different tissues of juvenile hybrid tilapia Red Florida were used. The goal was to
find, within four primer pairs designed by bioinformatics, the pair of specific primers
in the amplification of gene PepT1. The sample processing began with ethanol
fixation in 96% of tissue juvenile tilapia temperature under two conditions: Ambient
and deep freezing at -18 ° C. The DNA extraction protocol used was that of Genomic
DNA Mini Kit PureLink® (Catalog Numbers K1820-01, K1820-02, K1821-04)
Invitrogen®. For PCR amplification of different regions belonging to PepT1 gene,
various modifications of the programming performed thermocycler. The amplicons
were analyzed by agarose gel electrophoresis. Primer set was more effectively Fw 11
- 6bRev as a single band in electrophoresis was visualized, the other had double
band, additionally the condition ideal holding temperature was room for its better
observation gel. This study will help in later investigations nutritional tilapia,
allowing lower costs and shorter time required for analysis by use of this first
specific also measuring gene expression evidence PepT1 nutrient assimilation linked
thereto.
Description
En la presente investigación se utilizaron juegos de primers para la identificación en
el gen PepT1 en diferentes tejidos de juveniles híbridos de tilapia Red Florida. El
objetivo fue encontrar, dentro cuatro pares de primers diseñados mediante
bioinformatica, el par de primers específico en la amplificación del gen PepT1. El
procesamiento de las muestras se inició con la fijación en etanol al 96% de los tejidos
de las tilapia de juveniles bajo dos condiciones de temperatura: ambiente y
ultracongelación a -18°C. El protocolo de extracción de ADN que se utilizó fue el de
Mini Kit PureLink® Genomic DNA (Catalog Numbers K1820-01, K1820-02,
K1821-04) INVITROGEN®. Para la amplificación por PCR de las diferentes
regiones pertenecientes al gen PepT1, se realizó varias modificaciones de la
programación del termociclador. Los amplicones fueron analizados por electroforesis
en gel de agarosa. El juego de primers con mayor efectividad fue el 11 Fw – 6bRev
pues se visualizo una sola banda en electroforesis, los demás presentaron doble
banda, adicionalmente la condición de conservación ideal fue la de temperatura en
ambiente por su mejor observación en el gel. Este estudio ayudará en investigaciones
nutricionales posteriores de cría de tilapia, pues permite abaratar costos y menor
tiempo requerido para análisis por la utilización de este primer especifico, asimismo
la medición de expresión del gen PepT1 evidencia la asimilación de nutrientes ligado
al mismo.
Keywords
AMPLICONES,
ELECTROFORESIS,
ULTRACONGELACIÓN,
ADN,
FIJACIÓN EN ETANOL,
BIOINFORMÁTICA